强力植物Pro DNA提取试剂盒 中文说明书

PowerPlant® DNA Isolation kit

强力植物®Pro DNA提取试剂盒

简介

PowerPlant® Pro DNA Isolation Kit专门用于从植物细胞、组织、种子等中快速简便地提取总DNA。采用的珠磨研磨法取代传统累赘的CTAB法、苯酚发、氯仿法，从包括草莓叶、棉花叶、棉花种子和松针叶等顽固难提样品高质量DNA。PowerPlant® Pro DNA Isolation Kit在提取过程中还使用了专利的抑制因子去除技术®（IRT）来去除所有PCR抑制因子，最终DNA可直接用于PCR、qPCR和测序等下游实验。

 

配合PowerLyzer™24高速研磨机使用：

试剂盒中Bead Tubes预灌2.38mm不锈钢研磨珠，若需要其它类型的研磨珠套管请参阅
http://www.anbiosci.com/products/bead%20beating%20tubes.htm。

具体使用参数请查阅下文操作步骤。

配合其它高速研磨机：

在FastPrep®或Precellys®上使用本试剂盒循环参考：

PowerLyzer™24	Fastprep 24m/s	Precellys24
500	-	-
600	-	-
700	-	-
800	-	-
900	-	-
1000	-	-
1100	-	-
1200	-	-
1300	-	-
1400	-	-
1500	-	-
1600	-	-
1700	-	-
1800	-	-
1900	-	-
2000	-	-
2100	-	-
2200	-	-
2300	-	-
2400	-	-
2500	4	5000
2600	-	5200
2700	-	5400
2800	4.5	5600
2900	-	5800
3000	-	6000
3100	5	6200
3200	-	-
3300	-	-
3400	5.5	-
3500	-	-
3600	-	-
3700	-6	-
3800	-	-
3900	-	-
4000	-6.5	-
4100	-	-
4200	-	-
4300	-	-
4400	-	-
4500	-	-
5000	-	-

*Fastprep®及Precelly®无法设置低于2500rpm或高于4000rpm的转速范围。

 

多糖多酚分离溶液（PSS）

建议给富含多糖多酚的植物样品提取过程中添加多糖多酚分离溶液。

 

DNA平均得率

植物组织的类型、年龄以及多酚含量会影响DNA提取得率。下面是几种植物样品使用PowerPlant®Pro DNA Isolation Kit提取的平均DNA得率：

植物样品	DNA得率（50mg样品）	PSS
葡萄叶	2.5-3.5μg	＋
草莓叶	10-15μg	＋
番茄茎	10-25μg	＋
棉花叶	2.5-3.5μg	＋/ -
棉花种子	20-25μg	-
草叶	40-50μg	＋
松针	30-35μg	-
薄荷叶	2-3μ	-

*＋，添加PSS有助提高得率；-，添加PSS得率下降；＋/ -，是否添加PSS不影响得率。

 

设备要求

微型离心机（16000g）

移液器（50μl~600μl）

Vortex-Genie®2 涡旋仪（MO BIO货号#13111-V-220）或PowerLyzer™24或其它高速研磨机

涡旋仪适配器（MO BIO货号#13000-V1或13000-V1-24）

 

相关产品	货号	提取次数
UltraClean -htp 96 Well Plant DNA Isolation Kit	13096-4\13096-12	4×96次\12×96次
UltraClean® Plant RNA Isolation Kit	13300-20 13300-50	20次 50次
PowerLyzer™ UltraClean® Plant RNA Isolation Kit	13355-50	50次
PowerPlant® RNA Isolation Kit	13500-50	50次
PowerPlant® RNA Isolation Kit with DNase	13550-50	50次
PowerLyzer™ 24 Homogenizer	13155	一套
Vortex Adapter, holds 24 (1.5-2.0 ml) tubes	13000-V1-24	一个

 

试剂盒组分

	货号：13400-50
组分	量
Solution PD1	25ml
Solution PD2	3ml
Solution PD3	14ml
Solution PD4	32ml
Solution PD5	28ml
Solution PD6	2×30ml
Solution PD7	5.5ml
RNase A Solution (25 mg/ml)	165μl
Phenolic Separation Solution	2.2ml
PowerPlant® Bead Tubes	50
Spin Filters	50
2 ml Collection Tubes	150

△实验前请先逐一检查试剂!

 

保存

RNase A 4℃保存。其它组分室温（15-30℃）保存。

 

操作步骤：

1、往PowerPlant®Bead Tubes加入50mg植物样品及450μl PD1溶液。

【注意：若使用PSS溶液处理富含多酚样品（参照"DNA平均得率"），PD1溶液改用410μl，PSS溶液用40μl。】

这一步发生了什么：植物样品加到Tube管中准备研磨。PSS溶液把多酚与核酸分离开，后续抑制因子去除（IRT）步骤多酚降被去除。

2、使用前检查PD2是否沉淀，发生沉淀可37℃-55℃水浴溶解。加50μlPD2。

这一步发生了什么：PD2溶液含SDS。低温会发生沉淀。水浴后可趁热使用。

3、加入3μl RNase A溶液，稍微涡旋混匀。

这一步发生了什么：下面研磨过程中RNase A将消化样品中的RNA。

4、使用下列方法中的一种研磨样品：

A.涡旋仪：

把PowerPlant®Bead Tubes按在涡旋仪适配器（MO BIO货号：13000-V1或13000-V1-24）上。连续涡旋振荡10min。

B.PowerLyzer™24研磨：

1.、记号笔给PowerPlant®Bead Tubes的帽子和外壁都标记样品编号

【注意：鉴于PowerLyzer™24的强大外力，Tube帽子上的标记可能会被磨掉。建议给Tube管帽子和外壁都进行标号。】

2、把PowerPlant®Bead Tubes放入到PowerLyzer™24的Tube Holder中。所有Tube管包括空位上的都必须配平。根据样品选择合适的速度，1次循环研磨2min。

植物样品类型	速度	循环次数	时间/循环
柔软叶片组织	2000RPM	1	2min
富含纤维叶片组织	2200RPM	1	2min
茎	2200RPM	1	2min
根	2500RPM	1	2min
松针	2600RPM	1	2min
种子	2800RPM	1	2min

注意：最高研磨速度必须限制在上述指导速度的上限内，超出上限有可能导致PowerPlant®Bead Tubes破裂或渗漏。

这一步发生了什么：珠磨研磨法无需手工费劲研磨快速均质植物组织。某些情况下植物样品在规定研磨时间和循环后可能不能完全破碎，但此情况不影响获得理想DNA得率。

5、Bead Tubes 13000g离心2min。

这一步发生了什么：离心沉淀不要的细胞组织碎片。

6、把上清转移到一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。

【注意：根据样品类型，50mg的样品大约可获得450-550μl上清。上清中可能带有少量细胞碎片。】

这一步发生了什么：上清含有DNA已经其它细胞成分。尽量避免吸取到底部沉淀。

7、加入175μl PD3溶液。4℃孵育5min。

【注意：难提的样品此步PD3可增加到250μl。一般样品175μl即可。】

这一步发生了什么：PD3是创新的抑制因子去除技术（IRT）的重要组成之一，这步充分去除样品中的PCR抑制因子。

8、13000g离心2min。

这一步发生了什么：离心沉淀蛋白与腐植酸成分。

9、避开沉淀，转移600μl上清到一个新的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。

10、加入600μl PD4溶液和600μl PD6溶液。涡旋5s混匀。

这一步发生了什么：PD4为绑定盐溶液，其浓度及组分能使DNA选择性地吸附到硅胶离心柱上。PD6为含酒精的缓冲液，可使最大化绑定核酸到离心柱。

11、加载600μl上溶液到一个Spin Filter上，10000g离心30s。弃去滤液，Spin Filter重新放回到Tube管中，再加载600μl上溶液，然后离心，弃去滤液。重复步骤直到过滤完所有溶液。

这一步发生了什么：PD4和PD6溶液的共同作用下，DNA选择性地吸附到Spin Filter上。

12、加入500μl PD5溶液到Spin Filter离心柱中。10000g离心30s。弃去滤液。Spin Filter放回到Tube管中。

这一步发生了什么：PD5为含酒精冲洗缓冲液，可去除滤膜上残留的盐分及其它杂质。

13、加入500μl PD6溶液到Spin Filter离心柱中。10000g离心30s。弃去滤液，把Spin Filter放回到Tube管中。

这一步发生了什么：PD6溶液溶液为含酒精缓冲液，可进一步去离心柱滤膜上残留的盐分及其它杂质。

14、16000g再离心2min，去除残余的PD6溶液。

这一步发生了什么：重要步骤！进行下一步强必须清除残留冲洗缓冲液。

15、把Spin Filter转移到一个新的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。避免沾到任何PD6溶液。

16、加入50-100μl PD7（10mM Tris，pH8.0）到离心柱滤膜中间，室温孵育2min。

17、10000g离心30s。

【注意：为了最大化地洗脱，可把滤液冲洗加到白色滤膜上，10000g再离心30s。】

这一步发生了什么：PD7为10mM Tris，pH8.0。低盐缓冲液重溶洗脱滤膜上吸附的DNA，中心pH有主意保存过程中保护DNA。

18、弃去Spin Filter。洗脱液中的DNA可直接用于下游实验，无需进一步处理。

    DNA建议-20℃保存。PD7溶液不含EDTA。

疑点难点

珠磨研磨前样品加热

根据物种不同或某些植物部位，在添加PD1/PD2溶液前需要稍微加热，而可选溶液PSS使用前有时也需要65℃水浴10min溶解沉淀。实验发现大部分叶片、草叶、松针提取DNA前无需加热。具体样品请通过试验评估做出选择。

研磨力度

有些植物样品比建议或少或多的研磨速度和时间，请根据具体样品做出适当调整。

DNA保存

洗脱在PD7（1mM Tris，pH8.0）溶液中的DNA -20℃保存。也可以用TE（货号：17325-1000）或TE-4（10mM Tris，0.4mM EDTA，货号17320-1000）洗脱。

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