深圳市安必胜  

首页 | 企业邮箱 | 设为首页 | 加入收藏

 

首  页 公司简介 MOBIO试剂盒 仪器设备 技术文章 MOBIO参考文献 产品答疑 联系方式
  产品搜索
互联网 安必胜
  技术文章
联系方式
订购电话: 0755-8348 9872
传 真: 0755-8348 9700
订货邮箱:: anbiosci@126.com
技术支持QQ: 2306499490
客服QQ1: 854520684
客服QQ2: 1362545403
客服QQ3: 2759064681
  你所在的位置:技术文章 > 土壤DNA提取试剂盒 中文说明书

土壤DNA提取试剂盒 中文说明书

来源:深圳市安必胜科技有限公司 转载请注明出处【字号:

UltraClean® DNA Isolation kit

土壤DNA提取试剂盒

货号

提取次数

12800-50

50

12800-100

100

 

简介

MO BIOUltraClean® Soil DNA Isolation Kit已经成为了众多土壤微生物研究者的首选。可从土壤中国年提取高质量PCR级基因组DNA

 

珠磨研磨

UltraClean® DNA Isolation Kit 不需要使用高速度强力珠磨研磨设备。若目的微生物需要比涡旋仪还要强力的均质器才能提取得到,此试剂盒也可以用在PowerLyzer 珠磨研磨机上。MO BIO现在专门提供了PowerLyzer PowerSoil® DNA Isolation Kit(货号:12855-50),一款使用了适合强力珠磨研磨的研磨珠套管的土壤DNA提取试剂盒。

 

相关产品

货号

数量

UltraClean® Mega Soil DNA Isolation Kit

12900-10

10 Preps

UltraClean®-htp 96 Well Soil DNA Isolation Kit

12896-4

12896-12

4×96 Preps

12×96 Preps

UltraClean® PCR Clean-Up Kit

12500-50

12500-100

12500-250

50 Preps

110 Preps

250 Preps

Vortex Adapter, holds 24 (1.5-2.0 ml) tubes

13000-V1-24

1 unit

Ceramic Bead Tubes, 1.4 mm

Glass Bead Tubes, 0.5 mm

Glass Bead Tubes, 0.1mm

13113-50

13116-50

13118-50

50 tubes

50 tubes

50 tubes

PowerVac™ Manifold

11991

1 manifold

PowerVac™ Mini System

11992

1 unit + 20 adapters

PowerVac™ Mini Spin Filter Adapters

11992-10

11992-20

10 adapters

20 adapters

 

设备要求:

微型离心机(10000g

移液器(50μl~500μl

Vortex-Genie®2 涡旋仪(MO BIO货号#13111-V-220

涡旋仪适配器(MO BIO货号#13000-V113000-V1-24

试剂盒组分

 

货号:12800-50

货号:12800-100

组分

Bead Solution Tubes

(contain 550  l solution)

50

100

Solution S1

3.3ml

6.6ml

Solution IRS

11ml

22ml

Solution S2

14ml

27.5ml

Solution S3

72ml

143ml

Solution S4

16.5ml

30ml

Solution S5

3ml

6ml

Spin Filters units in 2 ml tubes

50

100

2 ml Collection Tubes

15

300

△实验前请先逐一检查试剂!

 

保存

组分室温(15-30℃)保存。

 

操作步骤:

1、  0.25~1g土壤样品到一个2ml bead solution tubes中。(要一次提取更大量土样,可选择UltraClean Mega Soil kit。关于加样量,可参考下文疑难点。)

这一步发生了什么:土样或粪便样品加入到Bead Tube 中。这是裂解细胞的首要步骤。Bead Solution是一个缓冲液,可分散开土样,并初步溶解腐植酸。

2、  轻轻涡旋混匀

这一步发生了什么:混匀样品与Bead Solution

3、  检查S1。若出现沉淀,60℃水浴至全溶解。

这一步发生了什么:S1溶液含有SDS,温度过低时会产生沉淀。60℃孵育可重溶SDS,并可趁热使用】

4、  加入60μl S1,上下颠倒数次混匀

这一步发生了什么:S1容易含有SDS,作为去垢剂可破坏细胞膜结构。

5、  加入200μl IRS 溶液。(仅当最终DNA需要跑PCR是才需要添加,否则省略)

这一步发生了什么:IRT是专门设计用于去除腐植酸和其它PCR抑制因子的专利溶液。若最终DNA是用于PCR扩增,此步不能省略。腐植酸呈棕色。富含有机质的土壤通常含有大量腐植酸。

6、  bead solution tubes安放到涡旋仪适配器中(货号13000-V113000-V1-24),或使用胶带固定在涡旋仪橡胶平板上。最大转速(3200rpm,若涡旋仪达不到此速度,可适当延长5~10min)涡旋振荡10min。(若使用24头涡旋仪一次处理多于12个样品,请把涡旋时间延长5-10min。)

这一步发生了什么:把Tube管牢靠地固定在涡旋仪上,对样品之间的一致性和DNA得率至关重要。只有胶带固定,容易在振荡过程中松开,影响研磨效果。我们已经设计出了专门用在涡旋仪上的适配器,可以紧紧卡住Tube管。

这步主要是引入机械作用力。在机械和化学试剂共同作用下裂解细胞。研磨珠不规则锋利外形与微生物细胞相互碰撞,破开细胞。

7、  室温10000g离心30s

这一步发生了什么:沉淀物含有细胞碎片、土壤、研磨珠以及腐植酸等。DNA在上清液中。

8、  转移上清到一个2ml 干净收集管中(视不同土壤类型,一般0.2g土样可获得400~450μl上清液,并可能混入少量土壤)

【注意:以加入0.25g土样计算,大约可获得400-450μl上清液,上清液中可能仍然带有部分土质。上清量因土壤类型不同可能有差异。

9、  加入250μl S2溶液,涡旋混合5s4℃孵育5min

这一步发生了什么:S2含有蛋白沉淀溶液。蛋白杂质会影响DNA纯度,并抑制下游DNA实验。

10     室温10000g离心1min

11     避开沉淀小球,转移450μl上清到一个干净的2ml收集管中

这一步发生了什么:沉淀物含有细胞碎片、土壤、研磨珠以及腐植酸等。为了更高的DNA得率和纯度,尽量避免吸到沉淀物

12     使用前摇匀S3溶液,加入900μl S3溶液到上清中,涡旋5s混匀

【注意:此时溶液可能很满,小心拿放。S3溶液为DNA绑定盐溶液。在高盐环境下,DNA会吸附绑定在硅胶薄膜上。】

13     加载700μl上清到一个Spin Filter中,10000g离心1min

14     弃去滤液,继续加载剩下的上清,10000g离心1min。注意,每个样品一共需要加载两次。

【注意:每次提取大概一共需要加载三次。DNA选择性地地府在硅胶薄膜上。其它成分则通过薄膜。】

15     加入300μl S4溶液,10000g离心30s

这一步发生了什么:S4是以酒精为主的洗液,可清除可能残留在薄膜上的高盐、腐植酸等其它杂质。注意:腐植酸较高的情况下你可以重复冲洗一遍。试剂盒配备的S4溶液有10%冗余。你还可以单独订购S4(货号:12800-100-4)。

16     弃去滤液

这一步发生了什么:滤液中只含有酒精洗液等废液。

17     室温10000g再次离心1min

这一步发生了什么:此步用于去除残留的S4溶液(含酒精)(也可吹干)。酒精成分去除不干净会影响电泳凝胶加样等下游实验,必须完全去除干净。

18     小心把spin filter转移到一个干净的2ml收集管中,避免S4溶液污染

这一步发生了什么:注意不要沾到任何S4溶液。

19     加入50μl S5到白色滤膜中央,

这一步发生了什么:S5(无菌洗脱缓冲液)要加入到薄膜中间,并保证整个薄膜能充分润湿。

20     10000g离心30s

这一步发生了什么:DNA随着洗脱液一起离心下来。DNA只在高盐环境下才吸附在硅胶滤膜上。S5溶液是pH8.0 10mM Tris缓冲液,不含盐。

21     弃去spin filter。此时收集管中的DNA可直接用于下游实验

    建议DNA冷冻保存(-20~-80℃)。S5溶液不含EDTA

 

若使用PowerVac Manifold抽吸代替离心

每个样品使用一个Spin Filter离心管。保持Spin Filter安放在2ml Collection Tube中知道需要真空抽吸滤过。记号笔标记标注好Collection Tube顶部及Spin Filter。若Spin Filter在过滤过程中堵塞,仍可以改为常规离心继续继续提取DNA

此操作说明书第四步需要外自备100%乙醇。

1、每一个样品需要安装一个铝质PowerVac™ Mini Spin Filter AdapterMO BIO货号:11992-1011992-20)到manifold的鲁尔接口上。轻轻用力安紧Spin Filter。关闭manifold其它所有不用的接口。

【注意:铝质PowerVac™ Mini Spin Filter Adapters可重复使用。】

2、加载650μl样品裂解物(接上文步骤12)到Spin Filter

3、打开真空泵,打开使用的端口的阀门。打开阀门是扶稳Spin Filter,保持直立。等待裂解物全部通过滤膜,再加650μl裂解物。继续抽吸滤过。关闭阀门。

【注意:可关闭已抽滤的端口,以提高其它端口压力,加快抽滤速度。】

4、加入800μl 100%乙醇到Spin Filter。扶稳Spin Filter,打开阀门抽滤。抽滤完成后关闭阀门。

5、每个Spin Filter加入300μl S4溶液。打开阀门抽滤。当所有S4滤完后,继续抽滤1 min,抽干滤膜。关闭所有端口。

6、关闭真空泵。打开一个未使用的端口释放manifold的压力。若20个端口都在使用,断开真空泵连接。进入下一步操作前确保真空压力已释放。必须先关闭真空泵,防止滤液倒流。

7、拿下Spin Filter,放回到原来标记的相应2ml Collection Tube中。13000g离心1 min以充分干燥滤膜。

8、把Spin Filter转移到一个新的2ml Collection Tube(试剂盒提供)中,加入50μl S5到白色滤膜中心。可选:可适用无菌DNA-Free Water洗脱DNA(货号:17000-10)。

9、室温10000g离心30s

10、弃去Spin Filter。此时滤液中的DNA可直接用于下游实验,无需进一步处理。

 

获得最大得率可选操作:

接步骤10

11、避开沉淀小球,转移所有上清到一个干净的收集管中

12S3溶液使用前先摇匀。加入1.3ml S3溶液到上清中,涡旋5s混匀。(溶液太满容易溢出,轻拿放)

接步骤13

 

疑点难点

加样量:

根据土壤类型,常规加样0.25-1g。吸水较多的如陶土,加样0.25g。水分较多的样品,见"湿土"部分。

部分土壤类型建议加样量:

土样类型

加样量(g

底泥 Sediments

0.25

粘土 Clay

0.10

陶土 Potting Soil

0.10

园土 Garden Soil

0.250

砂土 Sandy Soil

0.250

 

湿土:

若土样水分含量很高,可把bead Tube内容物转移出去,土样加入到tube管,10000g离心30s。移液器尽量去除多余水分。Bead tube内容物移回来,接着步骤2继续。

 

可选裂解方法:

加入S1溶液后,涡旋3~4s混匀。加入IRS溶液,涡旋3~4s混匀,70℃孵育5min。再涡3~4s70℃孵育5min。此可选步骤能增加DNA得率,但同时会降低DNA完整性。

最终DNA呈棕色

说明土壤中腐植酸含量很高。可重复15~18S4溶液的冲洗过程。若最终DNA仍然颜色较深,尝试三倍稀释最终DNA,加入两倍体积的S3溶液,重新过柱、冲洗、洗脱。

 

若细胞难裂解

若细胞难于裂解,可先行70℃水浴10min,然后加入S1溶液。接着步骤5继续。

点击下载PDF版

更多


上一篇:PowerSoil® DNA Isolation kit 强力土壤DNA提取试剂盒 中文说明书
下一篇:PowerPlant® DNA Isolation kit 强力植物Pro DNA提取试剂盒 中文说明书

关于我们 | 企业邮箱 | 管理登陆
版权所有. 2014 深圳市安必胜科技有限公司. 最佳分辨率1440×900
Copyright © 2007-2014 Anbiosci.com, All right reserved. 粤ICP备13063935